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通用PCR试剂盒特点、常见的问题及出现这些问题的原因

发布时间:2021-02-03 点击量:108
  通用PCR试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。通用PCR试剂盒它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物。
 
  因快速灵敏检测通用具有重要意义,本产品就是为此目的根据PCR原理开发的试剂盒。
 
  通用PCR试剂盒具有下列特点:
 
  1.即开即用,用户只需要提供DNA模板。
 
  2.引物经过精心优化,专一性强,只扩增通用,与其他植物没有交叉反应。
 
  3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
 
  4.PCRmix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
 
  5.本试剂盒足够做40μL体系的PCR50次,但只能用于科研。
 
  通用PCR试剂盒PCR常见的问题及原因:
 
  一、产生弥散条带:
 
  1、在PCR反应体系中一链产物的含量过高
 
  2、减少引物的用量
 
  3、优化PCR反应条件/减少PCR的循环次数
 
  4、在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时,其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增,一般会显示为弥散背景。
 
  3、由于mRNA剪切方式的不同,根据选择引物的不同将导致产生不同的RT-PCR结果。
 
  二、产生非特异性条带:
 
  1、用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果RT阴性对照的PCR结果也显示同样条带,则需要用DNaseI重新处理样品。
 
  2、在PCR反应中,非特异的起始扩增将导致产生非特异性结果。在低于引物Tm2至5℃的温度下进行退火,降低镁离子或是目的DNA的量将减少非特异性结果的产生。
 
  三、产生大分子量的弥散条带:
 
  1、大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的
 
  2、对于长片段的PCR,建议将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10(或1:100-1:200)
 
  四、在无反转录酶的情况下,对照RNA获得扩增结果。
 

通用PCR试剂盒